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2×Es Taq PCR Mix(PAGE胶专用)图片
产品货号:
WE0418
中文名称:
2×Es Taq PCR Mix(PAGE胶专用)
英文名称:
2×Es Taq MasterMix(for PAGE)
产品规格:
5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是由Es Taq DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系,浓度为2×。Es Taq DNA Polymerase具有扩增效率高、错配率低的优良性能。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,超过98%的PCR扩增能一次成功,同时复杂模板也能得到有效扩增,并可最大限度地减少人为误差和污染。本制品不含染料,PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的大部分PCR产物3′端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。主要适用于常规PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验,PCR扩增产物专用于聚丙烯酰胺凝电泳检测。




组分规格
2×Es Taq MasterMix(for PAGE)5×1mL
ddH2O5×1mL

保存:-20℃


2×Es Taq MasterMix含有Es Taq DNA Polymerase,3mM MgCl2和400μM each dNTP。


  • 经检验无外源核酸酶活性;
  • PCR方法检测无宿主残余DNA;
  • 能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。



以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
  • PCR反应体系
    成分用量终浓度
    2×Es Taq MasterMix(for Dye)25μL
    Forward Primer,10μM2μL0.4μM
    Reverse Primer,10μM2μL0.4μM
    Template DNA<0.5μg<0.5μg/50μL
    ddH2O至50μL
    注:引物浓度请以终浓度0.1~1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
  • PCR反应条件
    步骤温度时间循环数
    预变性94℃2min1
    变性94℃30 s25~35
    退火55~65℃30 s
    延伸72℃30 s
    终延伸72℃2min1
    注:
    • 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
    • 延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Es Taq DNA Polymerase的扩增效率为2kb/min。
    • 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

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